Durant le 16e siècle, les théories de l'Antiquité sur la couleur continuent à prédominer, bien que certains s'essayent à la construction des premiers espaces de couleurs. Mais d'un autre côté, les peintres et les artistes connaissent bien les mélanges que nous appelons soustractifs de nos jours. Léonard de Vinci propose même une palette de couleurs primaires. Il hésite à y inclure le vert car il peut l'obtenir par mélange du bleu et du jaune. Cela prouve bien que la notion de couleurs fondamentales et de couleurs dérivées était acquise.
On pourra faire toutes sortes d'hypothèses sur le bleu employé par Léonard de Vinci, mais le fait de vouloir remplacer le bleu (ou bleu cyan) par deux couleurs (bleu et vert) prouve bien que la sensation instinctive de la couleur était prédominante sur une notion de classement purement physique.